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基于rpoB基因的诺卡氏菌快速染色和诺卡菌状PCR的

时间:2019-05-04    点击量:

基于rpoB基因的诺卡氏菌抗PCR染色方法及PCR-RFLP分型诺卡氏菌的改进
张元
【概述】:目的:
本研究使用rpoB作为靶基因,使用标准诺卡氏菌菌株进行PCR-RFLP分型鉴定研究,以改善诺卡氏菌抗酸染色并建立快速PCR鉴定方案。-RFLP标准RFLP Nocardia指纹为快速准确的鉴别诊断诊断提供了可靠的参考标准。
材料和方法
1
使用革兰氏染色和酸染色对标准细菌进行染色。设计七种梯度染色溶液以改善抗酸染色,并比较三种染色方法的结果。
2
来自23个国际诺卡氏菌参考菌株的7 360 rpoB基因?通过PCR扩增Pb特异性片段,对PCR产物进行测序并通过限制性片段长度多态性(RFLP)进行分析。
结果:
1
在显微镜下,观察到Nocardia有三种形式:棒状,线状和球状。
使用0
125%硫酸和0。
改善的抗酸染色使用063%的硫酸作为脱色溶液具有最大染色率的100%,但迅速酸染色方法是由4%染色提高显示染色率。不到30岁
43%
所用硫酸脱色溶液的浓度为4%,2%,1%和0。
当使用5%快速修饰酸染色时,阳性对照结果总是阳性,阴性对照结果均为阴性。用硫酸溶解脱色溶液的浓度为零。
25%,0。
125%,0。
如果抗酸染色提高了063%,阴性对照染色的结果是假阳性。
2
用单一限制性内切核酸酶HaeIII消化360b rpoB基因的纯化PCR产物,得到7个图谱。将7种类型的诺卡氏菌株分为7种类型,纯化的360poB rpoB基因产物用单一MspI限制酶提取,酶消化显示16种模式,7种类型的诺卡氏菌分为16类。分类。
将限制酶HaeIII和MspI组合以获得总共16个图谱。其中,Nocardia和Nocardia guinya有该物种的特定地图,Nocardia有三个地图,Nocardia有四种,Nocardia sinensis和三种地图Nocardia faecalis有两个地图Nocardia sinensis有两种类型的地图。
结论:
1
0基于阳性和阴性对照获得的阳性结果。
5%硫酸脱色溶液改进了抗酸染色法作为最佳染色方法,诺卡氏菌检测率达到91。
3%
2
本研究建立的PCR-RFLP方法提供了16种能够清楚识别7 2 3种诺卡氏菌株的图谱,为临床诺卡氏菌的鉴定和预防提供了良好的基础。
3.为了鉴定从中国4个省分离的37株诺卡氏菌,36株属于诺卡氏菌,1株属于诺卡氏菌。
[学位授予单位]:南华大学[学位]:硕士课程[渐进学位]:2012[分类号]:R378
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